John Hopkins nació en Luton y se especializó en inglés en la Universidad de Leeds de 1993 a 1996. Como estudiante de grado, se unió al grupo de teatro de la universidad y apareció en varias obras, ganando finalmente el premio de actor estudiantil del "Sunday Times" por su actuación en "A Short Play About Sex and Death". Con sus credenciales teatrales así reforzadas, John fue admitido en la Royal Academy of Dramatic Arts de Londres, de la que se graduó en 2000. Casi de inmediato, fue reclutado por la prestigiosa Royal Shakespeare Company, con la que realizó su primera temporada de repertorio, de 2001 a 2002. Por esa época, su aspecto propició ofertas televisivas y, tras papeles menores en "Love in a Cold Climate" y "Trial and Retribution 7", le ofrecieron y aceptó el papel por el que es más conocido para el público no teatral, el del sargento Scott en la cada vez más forzada pero popular serie televisiva británica de misterio Midsomer Murders (1997).

Hay que reconocerle su mérito: dejó la serie tras la temporada 2004-2005 y volvió a la Royal Shakespeare Company para su temporada 2006-2007 tanto en Londres como en Stratford-upon-Avon, interpretando a César frente a Patrick Stewart en 'Antonio y Cleopatra'. Más recientemente, sus papeles teatrales han incluido a Richard Hannay en la versión cómica para cuatro actores de Patrick Barlow de 'Los 39 escalones', a Ricardo I en la nueva obra 'Holy Warriors' en el Shakespeare's Globe, y a Benedick en 'Mucho ruido y pocas nueces', una actuación que The Guardian dijo que "confirma a Hopkins como uno de nuestros mejores actores shakespearianos". De vuelta en televisión, fue un villano en 'Stan Lee's Lucky Man', e interpretó a Sir Francis Basset en dos temporadas del drama de la BBC 'Poldark'. En un artículo de 2020 en The Times (Londres), fue nombrado uno de los '10 de los mejores actores británicos actualmente en escena'.