Kristen Johnston a étudié le théâtre à l'Atlantic Theater Company Acting School de New York.

Elle a remporté deux Emmy Awards pour son rôle dans 3rd Rock from the Sun (1996). Elle est apparue dans de nombreuses autres séries télévisées, notamment Ugly Betty (2006), ER (1994), Bored to Death (2009) et, plus mémorablement peut-être, dans le rôle de la fêtarde dont les célèbres derniers mots furent « I'm so bored I could die » dans Sex and the City (1998). Elle est actuellement, à la télévision, dans la série à succès de TV Land, The Exes (2011), qui en est à sa quatrième saison. Parmi les nombreux crédits scéniques de Johnston figurent « So Help Me God! » (nomination aux Drama Desk Awards), « The Women », « Aunt Dan & Lemon », « Love Song » dans le West End, ainsi que la vedette de trois productions de « Shakespeare in Central Park », « Much Ado About Nothing », « 12th Night » et « The Skin of our Teeth ». Elle est membre de longue date de The Atlantic Theater Company, et ses rôles au fil des ans ont inclus « The Lights » (nomination aux Drama Desk Awards) et « Scarcity ». Les crédits cinématographiques de Kristen incluent Austin Powers: The Spy Who Shagged Me (1999), le 2e film Austin Powers (dans le rôle d'« Ivana Humpalot »), Finding Bliss (2009), Bad Parents (2012), Bride Wars (2009), L!fe Happens (2011), Vamps (2012), Strangers with Candy (2005) et le prochain film indépendant, Lovesick (2014), avec Matt LeBlanc. Johnston enseigne le théâtre à l'Acting School de The Atlantic Theater Company à NYU. Elle a fondé une organisation appelée SLAM, dont l'objectif est la création d'un lycée sans alcool et sans drogue désespérément nécessaire à New York. Le premier livre de Johnston était un mémoire best-seller du New York Times, intitulé « GUTS: the endless follies and tiny triumphs of a giant disaster ».